Primera Entrada – Enero 2009
Durante este semestre continuare con el trabajo que había comenzado el pasado semestre. Ya se lograron terminar las mutaciones de los diferentes AREs que se encuentran en la región no traducida del extremo 3’ (3’UTR) del gen de IL-3 en humanos. Solo faltaba mutar un nucleótido de los cinco que queríamos mutar del tercer ARE (ARE3). Ya obtenidas todas las mutaciones solo falta terminar los ensayos con el reportero luciferasa (Dual Luciferase Assay) y los ensayos para medir los niveles de mRNA de los constructos a través del Real Time-PCR. Luego de completar estos experimentos se podrá calcular la eficiencia traduccional de los constructos, cada uno con un diferente ARE del 3’UTR de hIL-3 mutado cada uno. Estos experimentos permitirán elucidar los efectos de cada ARE del 3’UTR de hIL-3 en la expresión de la proteína luciferasa y de esta manera entender el rol de estos AREs en el control traduccional de hIL-3.
La segunda meta para este semestre es repetir estos experimentos experimentos en Jurkat cells ya que estas células tienen relevancia fisiológica. Las Jurkat cells son células T. Estas células expresan hIl-3. Por esta razón también se comenzara a activar las Jurkat para ver los niveles de hIL-3 con las células activadas. Para esto, primero hay que determinar experimentalmente que agentes son mejores para activar estas células y ver en “time points” como se da la activación en estas células con los agentes que serán utilizados.
Los resultados de los experimentos en Jurkat cells se comparan con los resultados de los experimentos que hemos estado haciendo en HeLa cells que nos han servido como modelo para estudiar los efectos de secuencias reguladoras (AREs) en la expresión de la proteína luciferasa.
