Segunda entrada – Primer Semestre 2008 – 2009
Técnicas y su uso en mi proyecto
Durante los meses de agosto y septiembre he estado trabajando con técnicas de tranfeccion de células HeLa con los plasmidios que contienen las distintas mutaciones que se han hecho a los ARE contenidos en el 3’UTR de hIL-3. Luego de 48 horas de transfectar las células realice un Dual Luciferase Assay para medir la actividad de el gen reportero, luciferasa, con su control interno, renilla. Este ensayo permite determinar la cantidad de luminicencia emitida por luciferasa que es expresada por los plasmidios que contienen la secuencia que codifica para esta proteína, además del 3’UTR de hIL-3 con las secuencias que se están estudiando. Esta técnica nos permite estudiar el efecto que tienen estas secuencias en la expresión de luciferasa.
Por el momento he estado trabajando, en su mayoría, con técnicas que ya me eran familiares anteriormente. Esta semana comencé los preparativos para aprender la técnica de qRT-PCR. Aun no he podido aprender bien la técnica porque nos llego el equipo el día de ayer al laboratorio y hoy se estaba calibrando para poder utilizarlo.
Progreso logrado hasta el momento y dificultades encontradas
En una escala del 1-5 el progreso que he logrado en relación a las metas establecidas yo considero que mi proyecto, hasta el momento, tiene un 2 en progreso ya que se ha logrado aproximadamente en un 25 %. Aun no he logrado llegar a un 50% del proyecto ya que hemos tenido dificultades para mutar algunos de los AREs del 3’UTR de hIL-3. Se diseñaron nuevos primers para hacer las mutaciones por medio de PCR modificando el tamaño y limitando la cantidad de nucleótidos que se mutan en una sola reacción para tener mayor probabilidad de obtener el producto deseado. Aun no están todas las mutaciones que deseamos tener pero hemos comenzado a trabajar con las que hemos obtenido hasta el momento. Para el próximo mes espero haber logrado más de un 65 % de mis metas para este semestre.
